O glifosato é eficaz em matar uma grande variedade de plantas, incluindo gramíneas e plantas de folhas largas e lenhosas. em volume, é um dos herbicidas mais amplamente utilizados. Em 2007, o glifosato foi o herbicida mais utilizado no setor agrícola dos Estados Unidos, com 180 a 185 milhões de libras (82.000 a 84.000 toneladas) aplicados, o segundo mais usado em casa e o jardim com de 5 a 8 milhões de libras (2.300 a 3.600 toneladas) e o governo aplicou de 13 a 15 milhões de libras (5.900 a 6.800 toneladas) na indústria e no comércio. Ele é comumente usado para agricultura, horticultura, viticultura e silvicultura. como manutenção de jardins (incluindo uso doméstico). tem um efeito relativamente pequeno em algumas espécies de trevo e na corriola.

glifosato e herbicidas relacionados são frequentemente usados ​​na erradicação de espécies invasoras e na restauração de habitats, especialmente para melhorar o estabelecimento de plantas nativas em ecossistemas de pradarias. a aplicação controlada é geralmente combinada com um herbicida seletivo e métodos tradicionais de erradicação de ervas daninhas, como cobertura morta para obter um efeito ótimo.

em muitas cidades, o glifosato é pulverizado ao longo das calçadas e ruas, além de fendas entre asfalto, onde as ervas daninhas costumam crescer. no entanto, até 24% do glifosato aplicado em superfícies duras pode ser eliminado por contaminação com água-glifosato da água de superfície é atribuída ao uso urbano e agrícola. O glifosato é usado para limpar trilhos de trem e se livrar de vegetação aquática indesejada. desde 1994, o glifosato tem sido usado na pulverização aérea na Colômbia em programas de erradicação da coca; A Colômbia anunciou em maio de 2015 que, até outubro, deixaria de usar o glifosato nesses programas devido a preocupações com a toxicidade humana do produto químico.Além de seu uso como herbicida, o glifosato também é usado para a dessecação de culturas (siccation) para aumentar o rendimento da colheita e, como resultado da dessecação, aumentar a concentração de sacarose na cana-de-açúcar antes da colheita. a aplicação de glifosato imediatamente antes da colheita em grãos (como trigo, cevada e aveia) mata a cultura da comida para que ela seque mais rápida e uniformemente, semelhante ao uso de dessecantes.esta safra seca não precisa ser perfurada (envolta e seca) antes da colheita, mas pode ser facilmente cortada e colhida em linha reta. Isso economiza tempo e dinheiro do agricultor, o que é importante nas regiões do norte, onde a estação de crescimento é curta. Os níveis excessivos de resíduos em grãos resultantes da aplicação incorreta podem tornar a safra imprópria para venda.

em 2003, a Monsanto patenteou o uso do glifosato como um antiparasitário e, em 2017, comercializou uma formulação arredondada sem glifosato, como um herbicida de gramado.